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C4反相色譜柱在使用前建議進(jìn)行柱的性能測
點(diǎn)擊次數:884 發(fā)布時(shí)間:2022-01-17
C4反相色譜柱在使用前,建議進(jìn)行柱的性能測試,并將結果保存起來(lái),作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。
在做柱性能測試時(shí)要按照C4反相色譜柱出廠(chǎng)報告中的條件進(jìn)行(出廠(chǎng)測試所使用的條件是醉佳條件),只有這樣,測得的結果才有可比性。
但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同。
1、樣品的前處理
a、醉好使用流動(dòng)相溶解樣品。
b、使用預處理柱除去樣品中的性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
c、使用0.45μm的過(guò)濾膜過(guò)濾除去微粒雜質(zhì)。
2、流動(dòng)相的配制
液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的,因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn):
a、流動(dòng)相對樣品具有一定的溶解能力,樣品組分不會(huì )沉淀在柱中(或長(cháng)時(shí)間保留在柱中)。
b、流動(dòng)相與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應c、流動(dòng)相的黏度要盡量小,以便得到好的分離效果;降低柱壓降,延長(cháng)泵的使用壽命(可運用提溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度)。
d、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器,醉好使用對紫外吸收較低的溶劑配制。
e、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導致實(shí)驗無(wú)法進(jìn)行。
f、在流動(dòng)相配制好后,一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
3、流動(dòng)相流速的選擇
因柱效是柱中流動(dòng)相線(xiàn)性流速的函數,使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的C4反相色譜柱,要追求醉佳柱效,醉好使用醉佳流速。對內徑為4.6mm的C4反相色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對于內徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。
當選用醉佳流速時(shí),分析時(shí)間可能延長(cháng)??刹捎酶淖兞鲃?dòng)相的洗滌度的方法以縮短分析時(shí)間(如使用反相柱時(shí),可適當增加甲醇或乙腈的含量)。